Isothiocyanate de fluorescéineOrange rouge, isothiocyanate fluorescent jaune, isothiocyanate fluorescent rouge, isothiocyanate fluorescéine isomère I, 5- Isothiocyanate fluorescein . poudre jaune . La liaison ne perd pas la spécificité de la liaison avec certains antigènes . Il a toujours une forte fluorescence verte dans la solution alcaline . après avoir ajouté de l'acide, il se précipite et la fluorescence disparaît . En plus d'un médicament diagnostique médical, qui peut rapidement diagnostiquer les maladies causées par des bactéries, des virus, des parasites, etc. La fluorescence disparaît et elle est légèrement soluble dans l'acétone, l'éther et l'éther de pétrole .
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Formule chimique |
C21H11NO5S |
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Masse exacte |
389 |
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Poids moléculaire |
389 |
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m/z |
389 (100.0%), 390 (22.7%), 391 (4.5%), 391 (2.5%), 391 (1.0%), 392 (1.0%) |
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Analyse élémentaire |
C, 64.78; H, 2.85; N, 3.60; O, 20.54; S, 8.23 |
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Étudier les propriétés deIsothiocyanate de fluorescéineInsuline étiquetée pour la gélatine aminée et son application dans l'administration de la muqueuse nasale:
Sous l'état d'aucun émulsifiant externe, la solution aqueuse de gélatine aminée a été dispersée dans l'huile d'olive, et un nouveau type de microsphères gel chargées positivement, de microsphères de gélatine aminées, a été préparée à travers les processus d'émulsification, de gelance, M . La taille est répartie uniformément . Les microsphères séchées peuvent absorber environ 20 fois leur propre poids d'eau pour former des hydrogels . les microsphères aminés ont une teneur en aminé plus élevée que les microsphères gélifiées . et la solution de zosphate disposée dans un zosphère et la piste de phosphate et de la zosphate, et la zéro et le zéros de phosphate ont été positifs dans des eaux disposées dans des aquats et des effects de phosphate de la zatique et de la zosphate et de la zosphate et de la solution de phosphate à zéro, et de la solution de phosphate de la zature, et de la zosphate et de la piste de phosphate et de la zosphate, et de la zosphate et de la poncée ZATIC Le potentiel dans l'eau distillée est de 41 . 5 mV.
Avec l'augmentation de la concentration de glutaraldéhyde ou l'extension du temps de réaction de révision, la teneur en amino des microsphères a diminué . cependant, quelles que soient les conditions de réaction de réticulation, les microsphères de gélatine aminées préparées par cette méthode ont une teneur en aminé primaire plus élevée que les microsphères géliques à la gelatine. (1}} AMINO<1h) in the presence of trypsin, but slowly (>20h) Dans la pepsine et le milieu acide-base ., l'interaction entre les microsphères de gélatine et la mucine aminées sont plus fortes que celles entre les microsphères de gélatine . La densité de charge positive élevée des microsphoses de gelatine aminés est la principale raison de sa forte interaction avec la mucine . Les microsphères de gélatine ont été étudiées par méthode de marquage de fluorescence et technologie de dégradation des enzymes in vitro, en utilisant le modèle de lavage de perfusion gastrique de rat isolé et une expérience in vivo chez le rat .
Les résultats ont montré que dans les mêmes conditions expérimentales, le nombre de microsphères de gélatine aminés conservés dans l'estomac de rat isolé était supérieur à celui des microsphères de gélatine, et le type de solution d'irrigation (jus gastrique artificiel ou phosphate de phosphate de pH7) n'avait pas d'effet significatif sur la rétention gastrique des microsphères, ce qui n'était pas l'interaction électrostatique entre les microsphères et les microsphères pitèques ne faisait aucune intervention électrostatique entre les microsphères et les microsphères aériennes n'était pas l'interaction électrostatique entre les microsphères et les microsphères pito-tères n'était pas l'interaction électrostatique entre les microsphères et les microsphères pithématiques n'était pas l'interaction électrostatique entre les microsphères et les microsphères pito-toriques n'était pas l'interaction électrostatique entre les microsphères et les microsphères axées sur la mucus de mucus ne faisait aucune mucus. Facteur décisif pour la rétention gastrique des microsphères dans ce modèle . Cependant, dans l'expérience, il a été constaté que la quantité de microsphères de gélatine aminées conservées dans l'estomac de rat isolé diminuait avec l'augmentation de la concentration de l'agent de croisement glutaraldéhyde lors de la préparation des microsphères, ce qui a indiqué que l'agent glutaraldéhyde glutrique Les microsphères peuvent être affectées par la teneur en amino à la surface des microsphères ou le degré de réticulation .
Les résultats expérimentaux in vivo chez le rat ont montré que les microsphères de gélatine amino avaient une meilleure adhésion muqueuse que les microsphères de gélatine . Les effets de la gélatine aminée sur l'absorption nasale du glucane et de l'insuline ont été étudiées chez des rats sains . les résultats ont montré que 0 . Promouvez de manière significative l'absorption de la fluorescéine Isothiocyanat glucane de la muqueuse nasale de rat avec une biodisponibilité de 23 . 8%. Après l'administration intranasale de 10 tampons de phosphate d'insuline de 10 UI contenant 0 2% (w / v) gélatine amino, le niveau de glycémie était significativement inférieur à celui du tampon à insuline phosphate.
Isothiocyanate de fluorescéine(FITC), en tant que réactif de marquage fluorescent classique, est devenu un outil indispensable dans les domaines de la biologie, de la médecine et de la science des matériaux en raison de son rendement quantique élevé, de son excellente photostabilité et de sa bonne biocompatibilité .,
Le groupe isothiocyanate (- n=c=s) de FITC peut subir des réactions covalentes avec des groupes actifs tels que les groupes amino et thiol dans les biomolécules, formant des complexes de marquage fluorescent stables . ce caractéristique fait le réactif préféré pour les protéines, les acides nuclé
Étiquetage des protéines et recherche fonctionnelle
Le FITC réalise un marquage spécifique en se liant aux résidus de lysine des protéines telles que les anticorps et les lectines ., par exemple, dans les expériences d'immunofluorescence, les anticorps marqués par FITC peuvent se lier aux antigènes de surface cellulaire et analyser quantitativement les niveaux d'expression des antigènes L'intensité du conjugué IgG FITC est linéairement liée à la concentration d'antigène, et la sensibilité de détection peut atteindre le niveau de Danak ., en outre, les protéines marquées FITC peuvent également être utilisées pour les études d'interaction des protéines, telles que l'analyse des changements de conformation des protéines par la technologie de résonance de la fluorescence (FRET) Technologie.}
Étiquetage de l'acide nucléique et hybridation moléculaire
Le FITC peut être modifié chimiquement pour étiqueter l'extrémité 5 'ou 3' des acides nucléiques pour la technologie de l'hybridation in situ de fluorescence (FISH) . Dans la recherche sur le cancer, les sondes marquées FITC peuvent être en particulier des maladies hématologiques telles que la cible chromosomique Les gènes de fusion BCR-ABL peuvent afficher des signaux fluorescents jaunes dans les noyaux de cellules interphasiques avec un taux de précision de plus de 95% .
Étiquetage des peptides et livraison de médicaments
Les peptides marqués FITC jouent un rôle important dans les systèmes d'administration de médicaments . en prenant M2PEP-FITC à titre d'exemple, cette molécule est composée d'un peptide M2PEP ciblant et d'un groupe fluorescent FITC, qui peut reconnaître spécifiquement les récepteurs de surface des cellules tumorales et d'atteindre l'administration de médicaments ciblées . Expérimentés dans les lippements de M2POSE-Fitc dans les lippements étiquetés dans l'accumulation de M2POSEPOS dans les lippements étiquetés dans les lippements M2POSE-FITC dans les lippements étiquetés dans les lics-lics de M2POSE-FITC dans les lippements dans les licons Les tissus tumoraux sont 3 . 2 fois ceux des médicaments libres, améliorant considérablement l'efficacité thérapeutique et réduisant les effets secondaires.
Les propriétés de fluorescence du FITC en font «l'étalon-or» dans le domaine des diagnostics in vitro, largement utilisés dans des techniques telles que l'immunochromatographie, la cytométrie en flux et ELISA .
Détection rapide des agents pathogènes
Les anticorps marqués au FITC peuvent être utilisés pour un diagnostic rapide des infections bactériennes, virales et parasites ., par exemple, dans le diagnostic du paludisme, les anticorps anti-paludisme marqués FITC se lient au frottis sanguin du patient, et le signal de fluorescence verte de la parasite est observé par la microscopie traditionnelle . Le temps est observé à la microscopie traditionnelle {{1} 15 minutes, et la sensibilité atteint 98% ., en outre, des sondes d'acide nucléique marquées FITC peuvent également être utilisées pour détecter les acides nucléiques du virus respiratoire, tels que le gène ORF1AB de SARS-CoV -2, avec une spécificité de 99 . 2%.
Marqueurs tumoraux
En cytométrie en flux,Isothiocyanate de fuorescéineLes anticorps anti-CD45 marqués peuvent distinguer les cellules de leucémie des cellules sanguines normales .. (CTC) La technologie de détection peut capturer les cellules tumorales à des concentrations extrêmement faibles dans le sang périphérique, fournissant une nouvelle méthode pour le diagnostic précoce de tumeurs solides telles que le cancer du sein et le cancer du poumon .
Diagnostic des maladies auto-immunes
Dans la technologie ELISA, les auto-anticorps marqués par FITC (tels que les anticorps anti-nucléaires et les anticorps ADN anti-brin) peuvent être utilisés pour le diagnostic de maladies telles que les expériences systémiques du lupus érythémateux (LED) . significativement mieux que les méthodes d'immunofluorescence traditionnelles .
La perméabilité cellulaire et la faible toxicité du FITC en font un outil idéal pour l'imagerie cellulaire, largement utilisé dans la localisation des organiles, l'observation de la division cellulaire et la recherche d'apoptose .
Étiquetage des organiles cellulaires et observation dynamique
Les sondes mitochondriales étiquetées par FITC (telles que Mitotracker Green) peuvent se lier spécifiquement au potentiel de la membrane mitochondriale et surveiller les changements morphologiques mitochondriaux dans les anticorps protéiques de microtubules marqués par le FITC, les anticorps de la protéine de microtubules peuvent afficher l'extension dynamique des conses de croissance axé Les sondes lysosomes marquées FITC (Green Lysotracker) peuvent également être utilisées pour étudier les processus d'autophagie, quantifier le nombre d'autophagosomes par des changements d'intensité de fluorescence .
Analyse du cycle cellulaire et de l'apoptose
Dans la cytométrie en flux, l'iodure de propidium (PI) marqué par FITC peut se lier à l'ADN et distinguer les différentes étapes du cycle cellulaire (G 0 / g1, s, g2 / m) par intensité de fluorescence . données expérimentales montrent que la sensibilité de la méthode à double coloration pour le détection Talogre Méthode de coloration au bleu trypan . En outre, les sondes annexinnes V marquées FITC peuvent se lier spécifiquement à la phosphatidylsérine exposée à la surface des cellules apoptotiques, réalisant une identification précise des cellules apoptotiques précoces .
Recherche sur la migration cellulaire et l'invasion
Dans les expériences de Transwell, les cellules marquées par FITC peuvent surveiller le processus de migration en temps réel ., par exemple, dans l'étude des métastases tumorales, le taux de migration des cellules de cancer du sein marquées FITC (MCF -7) à travers la glue matricielle est positivement corré
Le FITC joue plusieurs rôles dans le développement de médicaments, notamment la validation de la cible, l'évaluation du système d'administration de médicaments et les études pharmacocinétiques .
Validation cible et mécanisme de recherche d'action
Les inhibiteurs de petites molécules étiquetés par le FITC peuvent être utilisés pour valider les cibles de médicament ., par exemple, les inhibiteurs de l'EGFR marqués par FITC (tels que le géfitinib) peuvent démontrer la liaison des médicaments aux récepteurs d'EGFR à la surface des cellules tumorales, quantifiant l'affinité de la braise (KD Valeur) Bid Sirny étant également utilisée . en plus, FitC a également utilisé l'intensité de fluorescence {{1}. Pour étudier l'efficacité de silençage des gènes, en fournissant une base pour la thérapie d'interférence de l'ARN .
Évaluation du système d'administration de médicaments
Les nanoparticules marquées FITC (telles que les liposomes et les microsphères en polymère) peuvent surveiller le comportement de distribution et de libération des médicaments in vivo en temps réel .
Des expériences ont montré que l'accumulation de liposomes PEGylée marqués par FITC dans les tissus tumoraux est de 2 . 8 fois celle des médicaments gratuits, et le signal de fluorescence peut durer 24 heures, fournissant des données visuelles pour optimiser les systèmes d'administration de médicaments.
Études pharmacocinétiques et toxicologiques
Les molécules de médicament marquées par le FITC peuvent être analysées quantitativement pour leurs processus d'absorption, de distribution, de métabolisme et d'excrétion (ADME) in vivo par le biais de la technologie d'imagerie de fluorescence ., par exemple, l'intensité de fluorescence des antibiotiques marqués par FITC (tels que la vanomycine) dans le médicament des joints est lié à la concentration médicamente DOSAGE . En outre, les tests de cytotoxicité marqués par FITC peuvent également évaluer les dommages des médicaments aux cellules normales et guider les évaluations de la sécurité .
Les caractéristiques de réponse de fluorescence du FITC le rendent uniquement applicable dans le domaine de la science des matériaux, y compris le développement de capteurs de pH, de capteurs de température et de sondes d'ion métallique .
Capteur de fluorescence sensible au pH
L'intensité de fluorescence deIsothiocyanate de fluorescéine is significantly affected by the pH value of the solution. In weakly acidic environments (pH 5.0-6.5), protonation of FITC groups leads to increased fluorescence intensity; Under alkaline conditions (pH>8 . 0), la fluorescence est éteinte . en fonction de cette caractéristique, les nanoparticules modifiées par FITC peuvent être utilisées pour surveiller l'intensité intracellulaire acide-base diagnostic.
Sonde fluorescente sensible à la température
La durée de vie de fluorescence des changements FITC avec la température . dans des conditions à basse température (4 degrés), la durée de vie de fluorescence des microsphères polymère marquée FITC est étendue à 5 . 2 nanosecondes, qui est 1 . 8 fois plus que la température de la salle (25 degrés). Cette caractéristique en fait un outil idéal pour étudier les processus de transition de phase et la cryoconservation cellulaire.
Sonde de détection d'ions métalliques
Le FITC réduit considérablement l'intensité de la fluorescence lorsqu'il est combiné avec des ions métalliques tels que Cu ² ⁺ et Hg ² ⁺, ce qui le rend adapté à la surveillance environnementale . Par exemple, les nanoparticules de gel de silice modifiées par FITC ont une limite de détection de 0.} 1 nm pour Hg ² ⁺ dans l'eau, qui est 100 fois plus haut que la spectre traditionnel.
L'application du FITC dans le domaine agricole est progressivement en expansion, notamment la détection du virus des plantes, le diagnostic des maladies animales et l'identification de la pureté de variété .
Détection rapide des virus végétaux
Les anticorps de virus marqués au FITC peuvent être utilisés pour détecter le virus de la mosaïque du tabac (TMV), le virus de la mosaïque du concombre (CMV) et d'autres virus . ont montré que la sensibilité de FITC-ELISA pour détecter le TMV est 0 . 1 ng / ml, qui est 10 fois plus traditionnel que les séologiques traditionnels sont plus élevé Méthodes . En outre, des sondes d'acide nucléique marquées FITC peuvent également être utilisées pour détecter les gènes exogènes dans des cultures génétiquement modifiées, telles que les gènes BT résistants aux insectes.
Diagnostic des maladies animales
Les anticorps marqués FITC peuvent être utilisés pour détecter le virus de la fièvre des porcs (CSFV), le virus de la grippe aviaire (AIV) et d'autres virus .
Dans le diagnostic de la fièvre porcine, les anticorps anti-CSFV marqués par FITC se lient aux coupes tissulaires et observent la distribution des virus par microscopie à fluorescence, réduisant le temps de détection à partir des méthodes traditionnelles de 3 jours à 6 heures . En outre, la cytométrie en flux de flux marqué FITC peut également être utilisée pour détecter les cellules T spécifiques aux animaux et à l'évaluation du sang et de l'évaluation de l'intensité de l'immunu
Identification de la pureté de variété
Les sondes d'ADN marquées FITC peuvent être utilisées pour identifier la pureté des variétés de cultures ., par exemple, la sonde FITC ciblant le gène de résistance à la maladie de riz d 'la maladie peut distinguer avec précision les homozygotes et les hétérozygotes dans les graines de riz hybride, avec une précision de pureté de 99 {. Les marqueurs moléculaires SSR marqués par FITC peuvent également être utilisés pour l'analyse de la diversité génétique des races de bétail et de volaille, fournissant une base scientifique pour la reproduction.
Synthèse de FITC: 4- Anhydride nitrophthalique (voir C8H3NO5, [5466-84-2]) réagit avec le resorcinol à 195-200 de degré C pour 10h, Cyclise dans un mélange de 3 'Nitrofluorescein et 4'-nitroflur Hydrolyse avec une solution d'éthanol d'hydroxyde de sodium saturé, 4 "La nitrofluorescéine est obtenue . alors 4 '- La nitrofluorescéine est dissoute dans l'eau de l'ammoniac, réagi avec du nickel rexhlet et hydrazine à température ambiante pour 2h, et la plupart des radios et des fluoresce d'amino éliminé pour obtenirIsothiocyanate de fluorescéine.
Le produit pur fitc est une poudre cristalline jaune ou orange, qui est facilement soluble dans l'eau et l'alcool solvant . Il existe deux isomères, parmi lesquels l'isomère de type I est meilleur dans l'efficacité, la stabilité et la liaison des protéines . Le poids moléculaire de FITC est 389 . 4, le maximum d'absorption La longueur d'onde des émissions est de 520 à 530 nm, montrant la fluorescence vert jaune vif . FITC peut être stocké pendant de nombreuses années dans des endroits froids, sombres et secs, et est la fluorescéine la plus utilisée . Son principal avantage est que l'œil humain est plus sensible au vert jaune, et la fluorescence verte dans le spécimen de section est généralement moins que le rouge jaune, et la fluorescence verte dans le spécimen de section est généralement moins que le rouge jaune.
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