Rétatrutide(lien:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptide/retatrutide-powder-cas-2381089-83-2.html) est un agoniste polypeptidique GLP-1R/GIPR/GCGR à action prolongée synthétisé chimiquement, destiné au traitement du diabète de type 2 chez l'adulte, à la gestion du poids et à la stéatose hépatique non alcoolique/stéatohépatite non alcoolique. L'indication de ce produit pour le diabète de type 2 chez l'adulte a été approuvée pour une utilisation clinique le 29 août 2023. De plus, la demande d'enregistrement clinique des indications pour la stéatose hépatique non alcoolique/stéatohépatite non alcoolique est en phase d'examen final. Il existe huit agonistes du GLP-1R/GIPR/GCGR en cours de développement dans le monde, parmi lesquels le Retatrutide de Rita a réalisé les progrès les plus rapides et a lancé l'essai clinique de troisième phase en juin de cette année. Le même mois, Rita a annoncé que les données de recherche de deuxième phase sur le rétatrutide avaient été publiées lors de la réunion annuelle de l'ADA, montrant qu'à 24 semaines, le rétatrutide (1 mg, 4 mg, 8 mg ou 12 mg) avait atteint le principal critère d'efficacité. évaluation pour les participants obèses ou en surpoids non diabétiques, avec une perte de poids moyenne de 17,5 %. Parmi les critères secondaires, une perte de poids moyenne de 24,2 % a été obtenue au terme de 48 semaines de traitement. Nous avons également synthétisé le peptide en laboratoire sur la base de la méthode publiée. La méthode de synthèse spécifique sera brièvement décrite et les étapes spécifiques peuvent nous être envoyées par e-mail.
Méthode 1 :
Les étapes détaillées de synthèse du Retarutide par synthèse à l’état solide en laboratoire sont les suivantes :
Préparer les réactifs et instruments requis : y compris les acides aminés, le dichlorométhane, le carbonate de potassium, le gel de silice éthoxylé, l'acétonitrile, la pyridine, la N-méthylmorpholine, la source de chlorure de diisopropyléthyle, l'acide trifluoroacétique, le DIPEA, les acides aminés protégés par Boc et d'autres réactifs, ainsi que des agitateurs magnétiques. , évaporateurs rotatifs et autres instruments.
(1) Synthèse des acides aminés protégés par Boc : dissolvez les acides aminés requis dans le dichlorométhane, ajoutez de la poudre de carbonate de potassium, remuez uniformément, ajoutez du gel de silice éthoxylé, continuez à remuer, puis ajoutez de la pyridine et de la N-méthylmorpholine pour obtenir des acides aminés protégés par Boc.
(2) Synthèse en phase solide : mélangez l'acétonitrile, la source de chlorure de diisopropyléthyle et l'acide trifluoroacétique, remuez uniformément, ajoutez les acides aminés protégés par Boc préparés et continuez à remuer pour obtenir le produit de synthèse en phase solide.
(3) Groupe de déprotection : dissolvez la synthèse en phase solide dans du dichlorométhane, ajoutez de l'acide trifluoroacétique, remuez uniformément, puis ajoutez du DIPEA. Continuer à agiter pour obtenir la synthèse en phase solide déprotégée.
(4) Purification : Dissoudre la synthèse en phase solide déprotégée dans l'eau, ajuster le pH à environ 9.0 avec une solution d'hydroxyde de sodium, puis ajuster le pH à environ 5.0 avec de l'acide acétique, et enfin précipiter le produit pur avec de l'éther.
Méthode 2 :
Les étapes détaillées de synthèse du Retarutide par synthèse en phase liquide en laboratoire sont les suivantes :
Préparez les réactifs et les instruments requis : notamment l'arginine, la glycine, l'anhydride acétique, la triéthylamine, le carbonate de potassium, le dichlorométhane, le méthanol, la pyridine, la N-méthylmorpholine, l'anhydride acétique, l'acétate de sodium et d'autres réactifs, ainsi que des instruments tels que des agitateurs, des entonnoirs de séparation, pompes à vide, fours et colonnes chromatographiques.
(1) Dissoudre l'arginine et la glycine dans une quantité appropriée de dichlorométhane, ajouter une quantité appropriée d'anhydride acétique et de triéthylamine et remuer uniformément sous un agitateur.
(2) Transférez le mélange dissous dans un four et chauffez-le à 80 degrés C pendant 1 heure pour acétyler les résidus d'acides aminés.
(3) Neutralisez la solution ayant réagi avec de la poudre de carbonate de potassium pour neutraliser l'acide acétique dans la solution afin de générer de l'acétate de sodium, puis extrayez le peptide généré avec du dichlorométhane.
(4) Laver la solution peptidique extraite avec du méthanol et filtrer avec une pompe à vide pour obtenir le peptide brut.
(5) Dissoudre le peptide brut dans une quantité appropriée de pyridine et de N-méthylmorpholine, ajouter une quantité appropriée d'anhydride acétique et d'acétate de sodium et remuer uniformément sous un agitateur.
(5) Filtrer la solution ayant réagi avec une pompe à vide, laver le gâteau de filtration avec du méthanol, puis filtrer avec une pompe à vide pour obtenir le Restarutide final.
Méthode 3 :
Les étapes détaillées de synthèse du Retarutide à l’aide de méthodes chimiques en laboratoire sont les suivantes :
Préparez les réactifs et les instruments requis : notamment l'arginine, la glycine, l'anhydride acétique, la triéthylamine, le carbonate de potassium, le dichlorométhane, le méthanol, la pyridine, la N-méthylmorpholine, l'anhydride acétique, l'acétate de sodium et d'autres réactifs, ainsi que des instruments tels que des agitateurs, des entonnoirs de séparation, pompes à vide, fours et colonnes chromatographiques.
(1) Dissoudre l'arginine et la glycine dans une quantité appropriée de dichlorométhane, ajouter une quantité appropriée d'anhydride acétique et de triéthylamine et remuer uniformément sous un agitateur.
(2) Transférez le mélange dissous dans un four et chauffez-le à 80 degrés C pendant 1 heure pour acétyler les résidus d'acides aminés.
(3) Neutralisez la solution ayant réagi avec de la poudre de carbonate de potassium pour neutraliser l'acide acétique dans la solution afin de générer de l'acétate de sodium, puis extrayez le peptide généré avec du dichlorométhane.
(4) Laver la solution peptidique extraite avec du méthanol et filtrer avec une pompe à vide pour obtenir le peptide brut.
(5) Dissoudre le peptide brut dans une quantité appropriée de pyridine et de N-méthylmorpholine, ajouter une quantité appropriée d'anhydride acétique et d'acétate de sodium et remuer uniformément sous un agitateur.
(6) Filtrer la solution ayant réagi avec une pompe à vide, laver le gâteau de filtration avec du méthanol, puis filtrer avec une pompe à vide pour obtenir le Restarutide final.
Plusieurs réactions de synthèse organique sont nécessaires pour obtenir la molécule cible. De plus, cette méthode utilise plusieurs réactifs organiques et des conditions opératoires complexes, de sorte que la synthèse chimique du Rotarutide en laboratoire n'est généralement pas adaptée à une production à grande échelle ou à des applications industrielles. Pour la production à grande échelle ou les applications industrielles, la méthode la plus couramment utilisée consiste à préparer le Rotarutide par des méthodes de synthèse telles que la biosynthèse ou la synthèse en phase liquide, qui sont relativement petites à l'échelle du laboratoire, relativement simples à utiliser et adaptées à la préparation de petites quantités de produits. . Le Retarutide obtenu par ces méthodes est similaire ou similaire en termes de structure et d'activité biologique au Retarutide synthétisé par des méthodes chimiques, mais présente les avantages d'un rendement plus élevé et d'une préparation plus facile. Dans le même temps, ils présentent également un meilleur potentiel d’industrialisation et des perspectives d’application plus larges.
Méthode 4 :
Les étapes détaillées de synthèse du Retarutide par des méthodes biologiques en laboratoire sont les suivantes :
Préparation des gènes et réactifs requis : obtenez des plasmides contenant le gène Retatrutide à partir de la bibliothèque de gènes, transformez les plasmides avec des cellules réceptrices (telles que Escherichia coli) et obtenez des bactéries d'ingénierie contenant le gène Retatrutide.
(1) Cultiver des bactéries techniques : dans des conditions appropriées de température, de pH et de concentration en ions, utilisez un milieu de culture pour cultiver des bactéries techniques, leur permettant ainsi de proliférer en grandes quantités.
(2) Extraction du Retarutide : Les bactéries industrielles cultivées sont broyées à l'aide d'un broyeur et les fragments cellulaires sont séparés du Retarutide à l'aide de méthodes telles que l'ultrafiltration et la sédimentation pour obtenir le produit brut.
(3) Purification du Retarutide : Le Retarutide brut est purifié à l’aide de la technologie de chromatographie pour obtenir du Retarutide de haute pureté.
Détection et identification du Rotarutide : Utiliser la chromatographie liquide haute performance, la spectrométrie de masse, la résonance magnétique nucléaire et d'autres techniques pour détecter et identifier la structure du Rotarutide purifié.
L'équation de réaction chimique pour la synthèse biologique du Rétarutide en laboratoire implique principalement les réactions chimiques au cours du processus d'expression génique, comprenant deux étapes : la transcription et la traduction.
Transcription : L'ADN double brin s'ouvre, en utilisant un brin comme matrice pour synthétiser les brins d'ARN, ce qui nécessite l'implication de l'ARN polymérase. L'équation de la réaction est la suivante :
ADN double brin : DNApol → ARNm+DNApol
Traduction : Les ribosomes se lient à l’ARNm pour synthétiser des chaînes peptidiques, un processus qui nécessite la participation d’acides aminés et d’énergie. L'équation de la réaction est la suivante :
Ribosome+ARNm → Chaîne peptidique+PIB+Pi+H2O
Chaîne peptidique+ATP → Chaîne peptidique+AMP+PPi
Parmi eux, DNApol représente l’ADN polymérase ; L'ARNM représente l'ARN messager ; Les ribosomes représentent les ribosomes ; Les chaînes peptidiques représentent des chaînes polypeptidiques ; Le PIB représente le diphosphate de guanosine ; Pi représente l'acide phosphorique inorganique ; H2O représente l'eau ; L'ATP représente l'adénosine triphosphate ; L'AMP représente l'adénosine monophosphate ; PPi représente le pyrophosphate inorganique. Ces réactions génèrent les chaînes peptidiques nécessaires à la synthèse du Retarutide, qui sont ensuite traitées et modifiées dans les étapes ultérieures pour obtenir le Retarutide.
Les méthodes ci-dessus sont courantes pour la synthèse du Rotarutide en laboratoire, chacune présentant des avantages, des inconvénients et un champ d'utilisation différents. Le laboratoire utilise généralement des méthodes de synthèse en phase liquide et de synthèse en phase solide pour une production à petite échelle à des fins de recherche et d'utilisation expérimentale ; La production industrielle, quant à elle, adopte une combinaison de biosynthèse et de production en phase liquide/solide pour une production à grande échelle afin de répondre à la demande du marché. Il convient de noter que ces méthodes nécessitent une optimisation stricte des conditions et un contrôle des processus pour garantir la qualité et la pureté du produit final.