La composante essentielle deIGF 1 LR3 Sprayest l'IGF-1 LR3 (Long R3 Insulin like Growth Factor-1), un analogue du facteur de croissance analogue à l'insuline-1 (IGF-1) génétiquement modifié. Il peut inverser la perte musculaire en inhibant la dégradation des protéines et en favorisant la synthèse musculaire, mais il est actuellement limité aux études précliniques. Les expériences sur les animaux ont montré que l'IGF-1 LR3 peut améliorer la structure des fibres musculaires, mais aucun essai sur l'homme n'a encore été mené. L'effet neurotrophique de l'IGF-1 LR3 peut favoriser la régénération axonale et la survie neuronale, mais sa capacité à pénétrer la barrière hémato-encéphalique doit être validée davantage. Il accélère la cicatrisation des plaies en stimulant la prolifération des fibroblastes, mais il faut se méfier du risque d'hypoglycémie.
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IGF1 LR3 COA
Matières premières et modification du génie génétique
technologies clés du produit
Source de gènes et sélection de l'hôte
IGF 1 LR3 Sprayest produit grâce à la technologie de recombinaison génétique et sa séquence génétique est modifiée en fonction du facteur de croissance de type insuline humaine - - 1 (IGF-1). L'hôte d'expression est généralement sélectionné parmi Escherichia coli (telles que les souches COH) ou les cellules de mammifères (telles que les cellules CHO), parmi lesquelles le système E. coli est largement utilisé en raison de sa grande efficacité et de son faible coût en fermentation à haute densité.
Modification de la séquence d'acides aminés
Mutation R3 : Le troisième acide aminé de l'IGF-1 naturel est l'acide glutamique (Glu), qui est remplacé par l'arginine (Arg) par l'IGF-1 LR3, formant le marqueur « R3 ». Cette mutation réduit considérablement son affinité pour les protéines de liaison au facteur de croissance analogue à l'insuline (IGFBP), augmente sa concentration libre de plus de 1 000 fois et améliore son activité biologique de 2 à 3 fois.
Extension N-terminale : ajoutez 13 résidus d'acides aminés à la fin de la chaîne B pour former une structure de chaîne de 83 acides aminés (certaines publications mentionnent 93 acides aminés, ce qui peut être dû à des différences dans les processus de purification ou les méthodes de détection), optimisant davantage sa fonction.
Processus de fermentation et de purification
processus de fermentation
Fermentation haute densité : l'expression d'Escherichia coli est induite par un choc thermique à 42 degrés, et la cuve de fermentation peut atteindre une capacité de 50 L. La protéine cible représente 30 à 40 % de la protéine bactérienne totale.
Optimisation du milieu de culture : contrôlez l'accumulation de sous-produits métaboliques (tels que l'acide acétique) et améliorez la pureté du produit grâce à une stratégie de culture par lots.
Processus de purification
Étape rugueuse et pure :
Chromatographie par échange d'ions : utilisation de la séparation par différence de charge des protéines pour augmenter la pureté à plus de 90 %.
Chromatographie d'interaction hydrophobe : élimine davantage les impuretés, atteignant une pureté supérieure à 95 %.
Étape pure :
Chromatographie d'exclusion moléculaire (SEC-HPLC) : séparez les protéines cibles des dimères ou des oligomères avec une pureté supérieure ou égale à 95 % (détectée par SDS-PAGE).
Concentration d'ultrafiltration : concentrez la protéine à l'aide de la technologie de filtration à flux tangentiel, tout en remplaçant le tampon par un système PBS (pH 7,4).
Filtration terminale : utilisez une membrane filtrante de 0,22 µm pour la stérilisation afin de garantir la stérilité.
contrôle de qualité
Vérification de l'activité : L'activité biologique a été mesurée par un test de prolifération sans sérum de cellules cancéreuses du sein humaines MCF-7, et la valeur ED50 était inférieure ou égale à 1,5 ng/mL.
Test de pureté : détection combinée SDS-PAGE et SEC-HPLC, pureté supérieure ou égale à 95 %.
Contrôle des impuretés : teneur en endotoxines Inférieure ou égale à 10 EU/mg, résidu de protéine hôte Inférieure ou égale à 0,005%, résidu d'ADN exogène Inférieur ou égal à 10 ng/mg.
Processus de préparation et stabilité
Formule protectrice pour la lyophilisation
En utilisant 8 % de tréhalose ou 5 % de mannitol comme protecteurs de lyophilisation-, combinés à 0,01 % de Tween 80 (solubilisant), les protéines liquides sont converties en poudre blanche grâce à la technologie de lyophilisation-, avec une teneur en humidité inférieure à 3 %.
Garantie de stabilité
Stockage à long terme
La poudre lyophilisée peut être conservée pendant 36 mois entre -20 degrés et -80 degrés, et après reconstitution, elle peut être placée dans des conditions stériles entre -20 degrés et -80 degrés pendant 6 mois et entre 2 degrés et 8 degrés pendant 7 à 10 jours.
Conditions de transport : les blocs de glace bleus sont réfrigérés pour le transport, garantissant que la température est maintenue entre 2 et 8 degrés et évitant les congélations et décongélations répétées.
Équipement de production et conformité BPF
Équipement de base
Système de fermentation : cuve de fermentation entièrement automatique de 50 L (équipée d'un système de surveillance du pH, de l'oxygène dissous et de la température en ligne).
Système de purification : purificateur de protéines AKTA Avant (prenant en charge la séparation chromatographique automatisée).
Matériel de préparation : Mini Spray Dryer B-290 (spray-dryer) ou lyophilisateur (pour la préparation de poudre).
Instruments analytiques : HPLC-MS (confirmation du poids moléculaire), analyseur de diffusion dynamique de la lumière (détection de la distribution granulométrique), test immuno-enzymatique-lié (ELISA).
Conformité BPF
L'environnement de production est conforme aux « Bonnes pratiques de fabrication des médicaments (révisées en 2010) » et contrôle strictement les indicateurs tels que les endotoxines bactériennes et les résidus de protéines hôtes.
Fournissez une documentation qualité complète, y compris le COA (Certificat de qualité), la MSDS (Fiche de données de sécurité) et les documents de support réglementaire.
IGF 1 LR3 Spray déforme le phénotype métabolique et la différenciation fonctionnelle des cellules gliales
IGF 1 LR3 Sprayest une préparation contenant un composant IGF-1 LR3, qui est un facteur de croissance semblable à l'insuline à action prolongée-artificiellement modifiée-. Il a une activité plus élevée que l'IGF-1 naturel, une demi-vie plus longue dans le corps et de meilleurs effets favorisant la croissance, ce qui peut favoriser la division, la migration et la différenciation de la plupart des cellules. Dans le domaine de la médecine, l’IGF-1 LR3 a suscité une large attention en raison de ses caractéristiques biologiques uniques et a été étudié pour explorer le potentiel thérapeutique de diverses maladies.
Les cellules gliales sont un élément important du système nerveux central, notamment les microglies, les astrocytes et autres. Ils jouent un rôle indispensable dans le maintien du fonctionnement normal du système nerveux, dans le soutien de la survie neuronale et dans la participation aux réponses immunitaires. Le phénotype métabolique et l'état fonctionnel des cellules gliales sont étroitement liés à la santé du système nerveux, et tout facteur affectant leur métabolisme et leur fonction peut avoir un impact significatif sur le système nerveux.
Phénotype métabolique et fonction des cellules gliales
Types et répartition des cellules gliales
Les cellules gliales du système nerveux central comprennent principalement les microglies et les astrocytes. Les microglies sont des cellules immunitaires du système nerveux central, largement distribuées dans le cerveau et la moelle épinière. Ils agissent comme des « gardiens » du système nerveux, surveillant constamment les changements dans l’environnement et jouant un rôle crucial dans le maintien de l’homéostasie immunitaire du système nerveux. Les astrocytes sont le type de cellules gliales le plus abondant dans le système nerveux central, possédant diverses formes et fonctions. Les astrocytes forment des connexions étroites avec les neurones, les vaisseaux sanguins, etc. à travers leurs processus, participent à la formation de la barrière hémato-encéphalique, fournissent un soutien nutritionnel aux neurones, régulent l'absorption et le métabolisme des neurotransmetteurs et ont un impact important sur le fonctionnement normal des neurones et la transmission des signaux neuronaux.
Phénotype métabolique des cellules gliales normales
Dans des conditions physiologiques normales, les cellules gliales présentent des phénotypes métaboliques spécifiques. Les microglies remplissent des fonctions de surveillance immunitaire à l'état de repos et leur activité métabolique est relativement faible, reposant principalement sur les voies de phosphorylation oxydative pour obtenir de l'énergie. Lorsqu'elles sont stimulées par une invasion d'agents pathogènes, des lésions tissulaires, etc., les microglies sont activées et leur phénotype métabolique subit des changements importants, passant à un mode métabolique dominé par la glycolyse, produisant rapidement de l'énergie et des molécules bioactives pour faire face aux défis externes. Dans des circonstances normales, l'activité métabolique des astrocytes est adaptée aux besoins métaboliques des neurones. Ils fournissent un soutien énergétique pour eux-mêmes et pour les neurones grâce à l'oxydation aérobie en ingérant du glucose. Dans le même temps, les astrocytes participent également au cycle du glutamate glutamine, convertissant le glutamate libéré par les neurones en glutamine et le transportant vers les neurones pour synthétiser à nouveau le glutamate. Ce processus est crucial pour maintenir l’équilibre des neurotransmetteurs et la fonction neuronale normale.
Fonctions des cellules gliales
Les cellules gliales remplissent plusieurs fonctions importantes dans le système nerveux central. En tant que cellules immunitaires, les microglies peuvent reconnaître et éliminer les agents pathogènes, les cellules endommagées et les agrégats protéiques anormaux, et participer à la régulation des réponses neuroinflammatoires. Au cours du développement neuronal, les microglies participent également à l’élagage synaptique, contribuant ainsi à façonner les connexions normales des circuits neuronaux.
Les fonctions des astrocytes sont plus étendues. Ils fournissent non seulement un soutien nutritionnel et structurel aux neurones, mais participent également à la régulation de la libération et de l’absorption des neurotransmetteurs, maintenant ainsi l’homéostasie des neurotransmetteurs. De plus, les astrocytes régulent le flux sanguin cérébral et participent au maintien de la fonction de la barrière hémato-encéphalique en interagissant avec les vaisseaux sanguins, protégeant ainsi le système nerveux des substances nocives en périphérie.
L'effet de l'IGF-1 LR3 Spray sur le phénotype métabolique déformé des cellules gliales
Modifications des voies métaboliques
L'IGF-1 LR3 contenu dans IGF-1 LR3 Spray peut activer les voies de signalisation en aval en se liant aux récepteurs IGF-1 à la surface des cellules gliales, affectant ainsi les voies métaboliques des cellules gliales. En termes de métabolisme énergétique, l'activation de la voie de signalisation IGF-1 peut favoriser la transition des cellules gliales de la phosphorylation oxydative à la glycolyse. Dans des circonstances normales, la phosphorylation oxydative est le principal moyen permettant aux cellules de produire de l’énergie, avec une efficacité élevée mais une vitesse relativement lente ; Bien que la glycolyse produise moins d’énergie, elle peut en fournir rapidement en peu de temps.
Lorsque l'IGF-1 LR3 agit sur les cellules gliales, il peut réguler positivement l'expression des enzymes glycolytiques et améliorer l'activité glycolytique en activant des voies de signalisation telles que PI3K/Akt et Ras/MAPK. L'altération de cette voie métabolique peut conduire à une « distorsion » du mode d'approvisionnement énergétique des cellules gliales, entraînant une régulation anormale du métabolisme énergétique face à différents états physiologiques ou pathologiques.
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