Tétraméthylbenzidine CAS 54827-17-7

Dans le domaine du diagnostic clinique in vitro, le TMB est le substrat chromogénique principal du test immuno-enzymatique (ELISA) et le composant fonctionnel principal de la grande majorité des kits de tests immunologiques. Dans le domaine de la détection sérologique des maladies infectieuses, les kits ELISA pour le dépistage des maladies infectieuses telles que l'hépatite BB, les anticorps de l'hépatite C et les anticorps du SIDA basés sur le système chromogénique TMB, avec une couleur de fond extrêmement faible et une sensibilité de détection élevée, sont devenus le schéma technique principal pour le dépistage sanguin à grande échelle-dans les stations de sang nationales.

Les données d'application des stations de sang nationales montrent que la limite minimale de détection de l'antigène de surface de l'hépatite BB peut atteindre 0,1 UI/mL avec le kit de dépistage sanguin utilisant le TMB comme substrat chromogène.

Par rapport au système chromogénique OPD traditionnel, le taux de faux négatifs manqués est réduit de 90 %, bloquant complètement le risque de transmission des maladies infectieuses liées à la transfusion depuis la source. Lors du dépistage ambulatoire de routine des maladies infectieuses dans les hôpitaux tertiaires, le kit ELISA du système colorimétrique TMB contrôle la différence entre les lots des résultats de détection dans une plage de 5 %, double la vitesse de détection par rapport aux méthodes traditionnelles et peut effectuer des tests à haut débit sur des milliers d'échantillons par jour.

Répond parfaitement aux besoins de dépistage précoce des maladies infectieuses dans des populations à grande échelle. Dans la détection clinique des hormones et des marqueurs tumoraux, l’avantage de haute sensibilité du système colorimétrique TMB est encore souligné. Dans la détection des indicateurs hormonaux de la fonction thyroïdienne tels que TSH, T3, T4, etc., la plage linéaire dynamique de développement de la couleur du TMB est trois fois plus large que celle des réactifs de développement de la couleur traditionnels, qui peuvent couvrir avec précision toute la plage de concentration, des individus en bonne santé aux patients atteints d'hyperthyroïdie et d'hypothyroïdie, évitant ainsi les fausses alarmes provoquées par les effets de crochet dans les échantillons à haute concentration.

Dans la détection clinique des marqueurs tumoraux, le kit ELISA basé sur le TMB peut détecter avec précision des marqueurs tumoraux tels que le CEA et l'AFP avec une concentration de seulement quelques ng/mL dans le sérum, fournissant ainsi des résultats quantitatifs fiables pour le dépistage précoce et la surveillance postopératoire des récidives du cancer.

Les données statistiques du service de pathologie d'un hôpital tertiaire en Chine montrent que le taux de détection des tumeurs gastro-intestinales précoces à l'aide du schéma de détection de combinaison de marqueurs colorimétriques de tumeurs TMB est 25 % plus élevé que les méthodes traditionnelles. Dans le scénario de diagnostic auxiliaire de détection rapide de l'antigène COVID-19, le TMB, en tant que composant principal du développement enzymatique de la couleur autre que la méthode de l'or colloïdal.

Il est appliqué dans le système de détection ELISA-à haut débit pour l'antigène COVID-19. La sensibilité de détection est d'un ordre de grandeur supérieure à celle de la méthode traditionnelle à l'or colloïdal, qui permet d'obtenir une détection positive au stade de faible charge virale, réduisant ainsi considérablement le taux de diagnostics manqués chez les personnes infectées précocement. Dans le système de support du test immunologique par chimiluminescence entièrement automatisé, le TMB, en tant que substrat amélioré pour la chimiluminescence directe de la peroxydase de raifort (HRP), peut améliorer considérablement l'intensité et la stabilité du signal de luminescence, augmenter le rapport signal-sur-bruit de la détection par chimioluminescence de 4 fois et contrôler la valeur CV du résultat de détection dans les 3 %, répondant pleinement aux exigences de détection de haute-précision du test immunologique haut de gamme entièrement automatisé. équipement.

Dans le domaine de la recherche biologique,tétraméthylbenzidineest le substrat chromogénique préféré pour les anticorps secondaires marqués par HRP dans les expériences de Western blot et est l'un des réactifs chromogéniques les plus couramment utilisés dans les laboratoires de biologie moléculaire. Dans les expériences traditionnelles de Western Blot, l’utilisation du système colorimétrique amélioré par chimiluminescence TMB peut détecter des protéines cibles aussi faibles que le niveau pg.

Par rapport à la méthode colorimétrique DAB traditionnelle, la sensibilité de détection est augmentée de deux ordres de grandeur et permet d'identifier facilement les changements d'expression des protéines de la voie de signalisation de faible abondance et des facteurs de transcription dans les cellules. Des données expérimentales comparatives provenant du laboratoire de biologie d'une université nationale montrent qu'en utilisant une solution luminescente optimisée à haute sensibilité TMB, le temps de développement du Western Blot a été raccourci des 30 minutes traditionnelles à moins de 10 secondes, avec des bandes de fond propres et sans impuretés. Deux bandes protéiques similaires avec une différence de poids moléculaire de seulement 1 kDa peuvent être clairement distinguées, améliorant considérablement la fiabilité des expériences d'immunoempreinte protéique.

Dans les scénarios expérimentaux d'immunohistochimie et d'immunohistochimie, le système de coloration TMB amélioré peut générer des produits insolubles bleus stables et localiser avec précision les positions d'expression des protéines cibles dans les tranches de tissus et les lames cellulaires. Par rapport à la coloration jaune brunâtre DAB traditionnelle, les produits de coloration bleu TMB forment une distinction de couleur douce avec les noyaux bleu violet colorés à l'hématoxyline, sans les problèmes communs de diffusion de bord et de coloration de fond non spécifique - de la coloration DAB. Dans les expériences de localisation des protéines des neurotransmetteurs dans le tissu neural et d'interprétation de l'expression de la protéine PD-L1 dans le tissu tumoral.

La reconnaissance des résultats de la coloration TMB est nettement meilleure que celle des méthodes de coloration traditionnelles, aidant les chercheurs à observer plus précisément la morphologie de la localisation subcellulaire des protéines.

Dans le scénario de recherche fondamentale sur l’analyse de l’activité enzymatique, le TMB est un substrat spécifique pour déterminer l’activité des traces de peroxydase. Sur la base de la spectrophotométrie colorimétrique d'oxydation TMB, l'activité enzymatique HRP avec une concentration aussi faible que 1 ng/mL dans l'échantillon peut être détectée avec précision. Il s’agit d’une méthode expérimentale classique pour étudier l’activité de la peroxydase végétale et des enzymes antioxydantes microbiennes. Dans la recherche de pointe en enzymologie à molécule unique, les molécules de TMB immobilisées peuvent générer des précipités colorés localisés sous la catalyse d'une seule molécule d'enzyme HRP.

La distribution spatiale et la cinétique catalytique d'une seule molécule d'enzyme peuvent être directement observées à l'aide d'un microscope optique, fournissant ainsi une méthode d'observation intuitive pour la recherche fondamentale en enzymologie à molécule unique. Dans le scénario de détection d'hybridation d'acide nucléique, la HRP est marquée sur la sonde d'acide nucléique et la séquence d'acide nucléique cible dans l'échantillon est détectée quantitativement par l'intensité de la couleur TMB. Sans avoir recours à un équipement de détection de fluorescence complexe, une détection qualitative et quantitative des acides nucléiques à faible coût peut être réalisée. Il a été largement utilisé dans les expériences de typage génétique et de criblage de composants génétiquement modifiés dans les laboratoires de recherche scientifique locaux.

Dans le domaine de la surveillance environnementale,tétraméthylbenzidineest largement utilisé comme réactif colorimétrique d'oxydation très sensible pour la détection rapide de traces de peroxyde d'hydrogène et d'ions de métaux lourds dans l'eau. Dans le scénario de tests de sécurité de l'eau potable, le système de détection colorimétrique par simulation de peroxydase basé sur le TMB peut détecter rapidement le désinfectant résiduel de peroxyde d'hydrogène dans l'eau potable aussi bas que 0,01 mg/L, bien en dessous des exigences limites des normes nationales d'hygiène de l'eau potable.

Le processus de détection ne nécessite pas de gros instruments, et un jugement semi-quantitatif peut être complété en observant la profondeur bleue de la solution à l'œil nu, ce qui est très approprié pour la surveillance d'urgence de la qualité de l'eau sur le terrain. Dans le scénario de détection d'ions de métaux lourds tels que le plomb et le mercure dans les plans d'eau, la peroxydase fonctionnalisée simulée par du nano-or peut répondre spécifiquement aux ions de métaux lourds. Grâce au changement de l'intensité de la couleur du TMB, une détection par visualisation hautement sélective des ions de métaux lourds peut être obtenue, avec une limite de détection allant jusqu'à 1 nM et un coût de détection de seulement 1 % de la spectroscopie d'absorption atomique traditionnelle.

Il a montré une valeur d'application extrêmement élevée dans le contrôle de la sécurité de l'eau potable en milieu rural et la surveillance rapide des sites de rejet d'eaux usées industrielles.

Dans le domaine des tests de sécurité alimentaire, le TMB est le composant principal de développement de la couleur de diverses bandelettes de test de détection rapide. Dans le scénario d'inhibition enzymatique, la détection de résidus de pesticides dans les aliments, les pesticides organophosphorés et carbamates inhibent l'activité de l'acétylcholinestérase. Grâce au couplage du changement de couleur du TMB catalysé par la peroxydase, le dépistage sur site des résidus de pesticides dans les légumes peut être rapidement effectué en 10 minutes.

La sensibilité de détection répond aux exigences limites des normes nationales de sécurité alimentaire et constitue la méthode de détection rapide la plus couramment utilisée pour les résidus de pesticides sur les marchés agricoles nationaux et les services de réglementation locaux. Dans la détection immunochromatographique de l'or colloïdal de petites molécules polluantes telles que le clenbutérol et la mélamine ajoutées illégalement dans les aliments, la technologie colorimétrique améliorée catalysée par une enzyme basée sur le TMB peut augmenter la sensibilité de détection des bandelettes de test d'or colloïdal traditionnelles de plus de 10 fois, permettant une détection précise des additifs illégaux à faible concentration et réduisant considérablement la probabilité de faux négatifs et de détections manquées.

Dans le scénario de détection rapide de la contamination microbienne des aliments, l'utilisation du peroxyde d'hydrogène généré au cours du métabolisme microbien, combinée à la réaction colorée du TMB, peut rapidement réaliser un dépistage semi-quantitatif du nombre total de bactéries dans les aliments en 2 heures. Par rapport à la méthode traditionnelle de culture sur plaque de 48 heures, le temps de détection est considérablement raccourci, ce qui est très approprié pour un contrôle qualité rapide des lignes de production alimentaire dans les entreprises de fabrication de produits alimentaires. Pour la détection rapide de l'aflatoxine B1 dans les aliments céréaliers et oléagineux, le système de détection ELISA basé sur le TMB a une limite de détection minimale de 0,1 μg/kg, répondant pleinement aux exigences strictes de limite de l'aflatoxine dans les aliments nationaux. Le coût de détection est bien inférieur à celui des méthodes de détection par spectrométrie de masse avec de grands instruments, ce qui le rend adapté aux enquêtes à grande échelle sur la sécurité alimentaire des céréales et des huiles.