Z-ARG-LEU-ARG-GLY-GLY-AMC CAS 167698-69-3

Il est souvent utilisé comme substrat peptidique pour le SRAS-CoV PLpro (Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus Papaya like Protease). Le SRAS-CoV est un coronavirus et son PLpro est une enzyme clé dans le processus de réplication du virus, participant au traitement des protéines polymères virales. Par conséquent, il présente une valeur d’application importante dans l’étude du mécanisme de réplication du SRAS-CoV, le dépistage de médicaments antiviraux et le développement de vaccins.

Il peut également servir de sonde fluorescente pour la recherche en imagerie biologique et en localisation cellulaire. En raison de la présence du groupe AMC (amino méthyl coumarine), ce peptide présente des propriétés de fluorescence et peut émettre de la fluorescence sous excitation. Cela permet le marquage de molécules ou de structures spécifiques dans les cellules et les tissus, révélant ainsi les changements dynamiques des processus biologiques.

Il peut également être utilisé pour le criblage d'inhibiteurs à haut débit et l'analyse continue. Dans le processus de développement de médicaments, il est crucial de trouver des composés capables d’inhiber efficacement l’activité d’enzymes ou de protéines spécifiques. En tant que substrat peptidique du PLpro, il peut être utilisé conjointement avec des inhibiteurs potentiels pour évaluer leur activité en mesurant les modifications du taux d'hydrolyse du substrat. Cette méthode présente les avantages d’un débit élevé, d’une sensibilité élevée et d’une spécificité élevée, ce qui peut considérablement accélérer le processus de dépistage des médicaments.

De plus, il peut également être appliqué à la recherche immunologique. Les substances peptidiques jouent un rôle important dans le système immunitaire et peuvent participer à la réponse immunitaire en tant qu'antigènes ou anticorps. La séquence et la structure spécifiques de Z-ARG-LEU-ARG-GLY-AMC peuvent lui conférer une immunogénicité ou une immunoréactivité, ce qui la rend adaptée à la préparation d'anticorps, de vaccins ou de réactifs d'immunodiagnostic.

PLpro est responsable du traitement des polyprotéines virales et de la fuite immunitaire de l'hôte, et constitue une cible clé pour les médicaments antiviraux. Le Z-LRGG-AMC, en tant que substrat spécifique au PLpro, a une efficacité de clivage plus de trois fois supérieure à celle des substrats traditionnels tels que le Z-Gly-Gly Arg AMC. Lors du dépistage des médicaments, les médicaments antiviraux potentiels peuvent être rapidement identifiés en détectant le taux d'inhibition des composés sur le clivage PLpro de Z-LRGG-AMC.

For example, a study used this substrate to screen candidate molecules with inhibition rate>90 % d'une bibliothèque de 100 000 composés, apportant un soutien clé au développement de médicaments antiviraux tels que le remdesivir. En comparant l'efficacité de coupe de différentes souches virales PLpro sur Z-LRGG-AMC, l'effet de la variation du virus sur l'activité de la protéase peut être révélé. Par exemple, le taux de réduction du SARS-CoV-2 PLpro sur Z-LRGG-AMC est 1,5 fois plus rapide que celui du SARS-CoV PLpro, ce qui suggère qu'il pourrait avoir une capacité de régulation immunitaire de l'hôte plus forte.

IPaseT et d'autres DUB régulent la dégradation des protéines en clivant la séquence C-terminale de l'ubiquitine. Z-LRGG-AMC simule la structure C-terminale de l'ubiquitine, avec une valeur kcat/Km de 18 M ⁻¹ s ⁻¹, ce qui en fait un substrat idéal pour étudier la cinétique DUB. Par exemple, dans la recherche sur le cancer, la relation entre le déséquilibre de l'homéostasie protéique et la progression tumorale peut être évaluée en détectant l'activité de clivage du DUB sur Z-LRGG-AMC dans les cellules tumorales.

Associé à la technologie de transfert d'énergie par résonance de fluorescence (FRET), le Z-LRGG-AMC peut être utilisé pour le-suivi en temps réel des processus de modification de l'ubiquitination intracellulaire. Par exemple, dans un modèle de maladie neurodégénérative, la détection du niveau d’ubiquitination de l’alpha synucléine révèle l’association entre son agrégation et le dysfonctionnement du protéasome.

Dans une plaque à 384 puits, Z-LRGG-AMC a été mélangé au composé testé et les inhibiteurs d'enzyme ont été rapidement criblés par les changements de signal de fluorescence. Cette méthode a un débit élevé (peut cribler des milliers de composés par jour) et un faible coût (coût à pore unique<0.1 USD), and has become a standard process for drug development. By changing the substrate concentration, the Km (Michaelis constant) and Vmax (maximum reaction rate) of the enzyme on Z-LRGG-AMC were determined, providing a theoretical basis for inhibitor design. For example, a study used this substrate to determine a Km value of 12 μ M for PLpro, providing key data for optimizing inhibitor affinity.