Sephadex G75est une sorte de remplissage de filtre en gel avec de bonnes performances. Il est préparé par le dextrane et épichlorhydrine réticulé. Il s'agit d'un gel en forme de perle avec une grande quantité de groupes hydroxyle, qui est facile à gonfler dans les solutions d'eau et d'électrolyte. La limite d'exclusion maximale de ce composé est de 80000, et le degré de gonflement spécifique dépend de la quantité de résine sèche et de conditions de fonctionnement. Par exemple, dans certaines conditions, le degré de gonflement de la résine sec peut être de 519 ml / g. Lorsque la plage de pH de fonctionnement est de 6,210 (5.210 pour certains produits), le composé peut rester stable. Il est recommandé de le stocker à température ambiante, de refroidir et de loin de la lumière dans la plage de température de 430 degrés (ou 425 degrés) pour maintenir ses performances et sa stabilité. Cette substance convient particulièrement aux grandes biomolécules avec un poids moléculaire supérieur à 80000. Principalement utilisé pour le dessalement et le remplacement du tampon de ces grandes biomolécules. Grâce à un fonctionnement à pas -, il est possible de désessiner rapidement, de supprimer les polluants et de transférer des molécules vers une nouvelle solution tampon. En plus du dessalement et du remplacement du tampon, Sephadex G-75 convient également au processus de purification des grandes biomolécules.
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Sephadex G75est un gel de dextrane, qui est principalement utilisé pour la technologie de séparation et de purification en biochimie et biologie moléculaire. Les principales utilisations de cette substance sont les suivantes:
Dans le processus de dessalement, il peut éliminer efficacement les sels (généralement des sels inorganiques de petites molécules) des solutions moléculaires biologiques. L'avantage de cette substance est qu'il est facile à utiliser, rapide et peut atteindre un dessalement efficace sans modifier l'activité des biomolécules. De plus, en raison de son excellente stabilité chimique et de sa biocompatibilité, il convient au traitement de dessalement de diverses biomolécules, y compris des protéines, des peptides, des acides nucléiques, etc. Dans des applications pratiques, le dessalement du gel est généralement combiné avec d'autres technologies de purification et la séparation des ions, la chromatographie d'affinité, etc.
Cette substance a un large éventail d'applications de remplacement des tampons, en particulier dans les champs de biochimie et de biologie moléculaire. Par exemple, dans le processus de purification des protéines, il est parfois nécessaire de transférer des protéines d'un système de tampon à un autre système tampon qui convient plus à leur stabilité et à leur activité. Et cette substance peut atteindre efficacement cet objectif; Dans le processus d'extraction de l'acide nucléique, il est également nécessaire de séparer l'acide nucléique de la solution contenant des impuretés et des sels, et de le transférer dans un nouveau tampon pour les opérations ultérieures. Il s'applique également à ce scénario; Pendant la culture cellulaire, il est parfois nécessaire de remplacer le milieu ou le tampon de culture pour maintenir la croissance et l'activité cellulaire. Il peut être utilisé pour éliminer les substances nocives des anciens supports ou tampons de culture et introduire de nouveaux supports ou tampons de culture.
Tamisage moléculaire
Dans les processus de recherche et de préparation des protéines, il est généralement nécessaire de séparer les protéines cibles des mélanges complexes. Il peut séparer les protéines en fonction de leur taille, atteignant ainsi la purification des protéines. En ajustant les conditions d'élution, telles que la résistance à l'ion et la valeur du pH de l'éluant, l'efficacité de séparation des protéines peut être encore optimisée. En plus des protéines et des acides nucléiques, il peut également être utilisé pour la séparation et la purification d'autres biomolécules, telles que les polysaccharides, les enzymes, les anticorps, etc. La vitesse de déplacement de ces biomacromolécules dans le gel dépend de leur taille et de leur forme, afin d'atteindre une séparation efficace. Bien que cette substance ne soit pas directement utilisée comme outil de détermination du poids moléculaire, elle peut servir d'outil auxiliaire dans la détermination du poids moléculaire.
Dans le processus de purification des protéines, il est généralement nécessaire d'éliminer les impuretés de petites molécules telles que les sels, les métabolites de petites molécules, les ligands non liés, etc. de la solution protéique. Cette substance peut éliminer efficacement ces impuretés de petites molécules des solutions de protéines, améliorant ainsi la pureté des protéines. Son effet de tamis moléculaire permet à ces impuretés de petites molécules d'être éliminées efficacement, entraînant des acides nucléiques plus purs. Les préparations enzymatiques contiennent généralement des impuretés de petites molécules telles que des substrats, des inhibiteurs, des métabolites, etc. Ces impuretés peuvent affecter l'activité et la stabilité des enzymes. Grâce à la filtration du gel du matériau, ces petites impuretés moléculaires peuvent être éliminées efficacement et la pureté de la préparation enzymatique peut être améliorée. En plus des protéines et des acides nucléiques,
Simuler la transduction du signal intercellulaire
La transduction du signal inter cellulaire est le mécanisme de régulation de base des activités de vie, impliquant des processus complexes tels que la reconnaissance cellulaire, la conversion du signal et la réponse physiologique. La recherche traditionnelle repose souvent sur des modèles de cellules vivants, mais il existe des limites telles que les réseaux de signaux complexes et plusieurs facteurs d'interférence.Sephadex G75est un milieu de filtration de gel de dextrane classique. Sa structure poreuse et son effet de tamis moléculaire fournissent un modèle physique unique pour simuler la transduction du signal intercellulaire.
Un modèle physique pour simuler la transduction du signal intercellulaire à l'aide de Sephadex G-75
Simulation des jonctions intercellulaires d'écart
Gap Junction est un canal hydrophile formé entre les cellules adjacentes par un linker, permettant l'échange libre de petites molécules avec un poids moléculaire<1500 Da. The pore size range of Sephadex G-75 (40-300 μ m) is much larger than that of intercellular junctions (about 1.5 nm), but its porous structure can simulate molecular diffusion processes in local microenvironments. For example:
Formation de gradient des molécules de signal: différentes concentrations de molécules de signal (telles que CAMP, CA ² +) sont chargées dans la colonne de gel. La différence de taux de diffusion des petites molécules dans le pore de gel peut être observée par l'effet de tamis moléculaire, et la transmission du gradient des signaux chimiques entre les cellules peut être simulée.
Simulation de réponse synergique: deux molécules en interaction (telles que le ligand et le récepteur) sont chargées respectivement aux deux extrémités de la colonne de gel, et leur cinétique de liaison est analysée par le décalage horaire de l'élution pour simuler le processus de reconnaissance moléculaire dans la communication de contact direct entre les cellules.
Simulation du contact moléculaire sur la surface de la membrane
La communication entre les molécules de surface membranaire repose sur les interactions spécifiques des protéines de surface de la membrane cellulaire. Sephadex G-75 peut simuler ce processus par modification fonctionnelle:
Expérience de liaison au ligand des récepteurs: les protéines des récepteurs biotinylées (telles que l'EGFR) sont fixées à la surface des particules de gel, les ligands marqués par fluorescence (tels que l'EGF) sont capturés à travers le système de biotine de streptavidine, et l'intensité du signal de liaison est surveillée avec un détecteur de fluorescence pour quantifier l'affinité des récepteurs récepteurs.
Analyse de liaison compétitive: Préchargement du complexe du ligand récepteur dans la colonne de gel, ajouter des inhibiteurs compétitifs de différentes concentrations (telles que les anticorps anti-EGFR), calculer la constante d'inhibition (Ki) par le décalage de pic d'élution et simuler l'effet d'intervention des médicaments sur les voies du signal cellulaire.
Simulation de la transmission du signal chimique
La transduction du signal chimique repose sur la diffusion des molécules de signalisation chimique (telles que les hormones et les cytokines) sécrétées par des cellules par des fluides corporels ou une matrice extracellulaire aux cellules cibles. Sephadex G - 75 peut construire un modèle de diffusion tridimensionnel:
Simulation du système de paracrine: les cellules sécrétoires (telles que les macrophages) et les cellules cibles (telles que les cellules T) sont respectivement encapsulées dans les microsphères de gel, et l'état d'activation des cellules cibles (comme l'expression de CD69) est observé par la culture du CO pour simuler l'effet local des signaux paracrines.
Transmission du signal endocrinien: les hormones marquées par fluorescence (telles que l'insuline) sont chargées dans la colonne de gel, et leur interaction avec les pores de gel est analysée à travers le temps d'élution, et la moitié - des hormones dans la circulation sanguine et la distribution des organes cibles est prédite en combinant les modèles mathématiques.
Cas d'application de Sephadex G-75 dans la recherche sur la signalisation cellulaire
Recherche sur la transduction du signal des globules rouges et la fonction de l'intégrine
L'intégrine IIB 3 du récepteur d'adhésion plaquettaire est la glycoprotéine la plus abondante à la surface de la membrane plaquettaire et est cruciale pour l'hémostase et la formation de thrombus. Étudiez l'utilisation de Sephadex G-75 pour simuler l'interaction entre les plaquettes et le collagène sous-endothélial:
Modèle d'activation de l'intégrine: L'intégrine purifiée IIB 3 a été fixée à la surface des particules de gel, et le fibrinogène soluble (FG) a été ajouté sous forme de ligand. La cinétique de liaison a été détectée par résonance plasmonique de surface (SPR). Il a été constaté que l'affinité de l'intégrine à FG après l'activation était significativement améliorée (KD a été réduit de μ m à NM).
Dépistage des médicaments antiplaquettaires: complexe de préchargement de l'intégrine FG dans la colonne de gel, ajouter des médicaments antiplaquettaires de différentes concentrations (tels que le tirofiban), calculer le taux d'inhibition des médicaments sur l'activité de l'intégrine par le déplacement de pic d'élution et fournir une plate-forme de dépistage de lancement- élevée pour le développement de nouveaux médicaments antithrombotiques.
Régulation des voies de signalisation liées à la tumeur
Les cellules tumorales favorisent la prolifération et les métastases par l'activation anormale des voies de signalisation telles que MAPK et PI3K / AKT. Sephadex G-75 peut être utilisé pour isoler et purifier les protéines clés dans les voies de signalisation:
Recherche de la voie du signal EGFR: La protéine EGFR a été purifiée par filtration du gel Sephadex G-75, et son statut de phosphorylation a été analysé par spectrométrie de masse. Il a été constaté que le niveau de phosphorylation des sites Y1068 et Y1086 d'EGFR a été significativement augmenté après la stimulation de l'EGF, qui a activé les signaux ERK1 / 2 et AKT en aval.
Analyse des mécanismes de résistance aux médicaments: dans les cellules cancéreuses gastriques résistantes médicamenteuses ({0}} (SGC7901 / VCR), la protéine UHRF1 a été isolée et purifiée par Sephadex G-75, et il a été constaté que sa surexpression peut inhiber l'activation des protéines liées à l'apoptose (TELS CASPASE-3), une réduction de la chimiothérapie du médicament de la chimiothérapie (IC ₅ a augmenté en caspase-3),, à la réduction de la chimiothérapie, la sensibilité des médicaments (IC ₅ a augmenté par 3-3).
Signalisation des cellules immunitaires et régulation des polysaccharides
Les polysaccharides d'algues rouges (BFP) améliorent la réponse immunitaire en activant les voies de signalisation NF - κ B et MAPK dans les macrophages. Recherche sur la séparation et la purification de BFP et de ses composants (F1, F2, F3) en utilisant Sephadex G-75:
Polysaccharide component analysis: BFP, F1, F2 and F3 with purity>95% ont été obtenus par filtration de gel Sephadex G-75 combinée avec une chromatographie d'échange d'ions de cellulose de Deae 52, et leurs poids moléculaires étaient respectivement de 120 kDa, 85 kDa, 60 kDa et 45 kDa.
Activation de la voie du signal: Dans le modèle de macrophage RAW264.7, BFP et ses composants peuvent induire de manière significative la sécrétion de NO et TNF -, et son mécanisme implique NF - κ B translocation et phosphorylation de JNK, ERK et P38. Les composants purifiés séparés par Sephadex G - 75 ont montré que F1 avait l'effet d'activation le plus fort sur NF - κ B et les voies MAPK (augmentant la production de non de 2,5 fois et TNF - sécrétion par 3 fois).
étiquette à chaud: Sephadex G75 CAS 37224-29-6, fournisseurs, fabricants, usine, gros, acheter, prix, vrac, à vendre