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Peptide 3XFLAGest une séquence marqueur peptidique importante largement utilisée dans les processus d’expression et de purification des protéines dans la recherche biomédicale. Formule moléculaire C120H169N31O49S, CAS 402750-12-3. Composée de 23 acides aminés, sa séquence contient trois motifs répétés Asp Tyr Lys Xaa Xaa Asp, qui lui confèrent des caractéristiques structurelles spécifiques.
A une bonne solubilité dans des solvants spécifiques. Par exemple, dans le DMSO, sa solubilité est élevée, ce qui le rend pratique pour les opérations et les expériences en solution. De plus, il peut également obtenir un bon effet de dissolution dans l'eau grâce à un léger chauffage. Il possède également des propriétés particulières. Par exemple, il présente une bonne antigénicité et une bonne réactivité et peut se lier à des anticorps anti-FLAG spécifiques. Cette capacité de liaison le rend largement applicable dans des expériences telles que l'immunoprécipitation. En se liant de manière compétitive aux anticorps anti-FLAG, la protéine exprimée par fusion FLAG qui se lie aux anticorps anti-FLAG peut être éluée pendant l'immunoprécipitation, permettant ainsi la localisation, la détection et la purification de la protéine cible.
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Capsules et bouchons de bouteilles personnalisés :
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Formule chimique |
C120H169N31O49S |
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Masse exacte |
2860 |
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Poids moléculaire |
2862 |
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m/z |
2861 (100.0%), 2860 (77.0%), 2862 (32.9%), 2862 (31.4%), 2863 (22.1%), 2862 (11.5%), 2863 (10.1%), 2861 (8.8%), 2864 (8.1%), 2862 (7.8%), 2863 (7.4%), 2863 (5.3%), 2863 (4.5%), 2862 (3.5%), 2864 (3.3%), 2864 (3.2%), 2865 (2.2%), 2865 (2.1%), 2864 (2.1%), 2862 (1.9%), 2862 (1.9%), 2861 (1.5%), 2864 (1.5%), 2861 (1.4%), 2864 (1.4%), 2863 (1.2%), 2864 (1.2%) |
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Analyse élémentaire |
C, 50.36; H, 5.95; N, 15.17; O, 27.39; S, 1.12 |
Peptide 3XFLAGest une étiquette utilisée dans la recherche sur les protéines, composée de 8 acides aminés avec la séquence DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK. Sa fonction principale est de servir de marqueur pour l’expression et la purification des protéines, fournissant ainsi un moyen pratique et efficace pour la recherche.
1. Purification par affinité :
Il peut être utilisé comme marqueur pour la purification des protéines et, grâce à sa haute affinité avec les anticorps anti-FLAG, la protéine cible peut être facilement purifiée. Habituellement, la protéine cible est co-transfectée dans des cellules avec un vecteur d'expression contenant 3X FLAG PEPTIDE, puis purifiée par affinité à l'aide d'anticorps anti FLAG pour obtenir rapidement et efficacement une protéine cible de haute pureté.
2. Tests immunologiques :
En raison de sa forte immunogénicité, il peut être utilisé pour détecter l’expression et la localisation des protéines. En utilisant des anticorps anti-FLAG spécifiques, des techniques expérimentales telles que l’immunotransfert et la coloration par immunofluorescence peuvent être réalisées pour détecter rapidement et avec précision le niveau d’expression et la distribution des protéines cibles.
3. Filtrage des clones :
Il peut également être utilisé pour faciliter le criblage de clones de protéines. Dans le processus de construction de vecteurs d'expression protéique, la connexion de la séquence génique de la protéine cible à la séquence 3XFLAG peut faciliter le criblage de clones positifs avec la protéine cible par détection immunitaire et d'autres méthodes, accélérant ainsi le processus de recherche sur la fonction des protéines.
4. Immunoprécipitation :
Il peut également être utilisé pour des expériences d’immunoprécipitation de protéines. En liant des protéines contenant des étiquettes 3X FLAG PEPTIDE à des anticorps anti-FLAG, puis en utilisant des matériaux d'adsorption tels que la protéine A/G agarose ou des billes magnétiques, la protéine cible et ses partenaires d'interaction peuvent être précipités sélectivement à partir d'extraits cellulaires pour étudier le réseau d'interactions protéiques.
5. Dépistage des drogues :
Il peut également être utilisé dans la recherche sur le dépistage des drogues. En combinant l'étiquette 3X FLAG PEPTIDE avec la protéine d'intérêt, un criblage à haut débit de la protéine peut être obtenu. Cette méthode de criblage peut être utilisée pour découvrir de nouvelles cibles médicamenteuses, évaluer les interactions médicamenteuses-protéines, etc.
6. Recherche sur la fonction des protéines :
L'introduction de marqueurs n'affecte pas de manière significative la structure et la fonction naturelles des protéines et peut donc être utilisée pour étudier les fonctions biologiques, la localisation subcellulaire, les interactions et la transduction du signal des protéines. En introduisant le tag 3X FLAG PEPTIDE,-des recherches approfondies peuvent être menées sur les caractéristiques biologiques des protéines, ce qui permet de révéler leurs mécanismes d'action en biologie cellulaire et en physiologie.
Peptide 3XFLAGest un peptide contenant 8 acides aminés, de séquence DYKHDGDYKDHDIDYKDDDDK. Il est couramment utilisé comme étiquette protéique pour une purification, une détection et une recherche pratiques des protéines cibles. Au cours du processus de biosynthèse, il peut être préparé par des méthodes de synthèse chimique ou de génie génétique. Voici les étapes détaillées des méthodes de génie génétique :
1. Concevoir et synthétiser des gènes :
Tout d’abord, il est nécessaire de concevoir un gène artificiel contenant la séquence 3X FLAG PEPTIDE. Ce gène doit contenir la séquence 3X FLAG PEPTIDE, ainsi que les promoteurs, terminateurs et marqueurs de sélection appropriés (tels que les gènes de tolérance aux antibiotiques). La conception des gènes doit tenir compte des caractéristiques et des besoins d’expression de l’hôte cible.
2. Clonage de gènes :
Ensuite, les gènes artificiels conçus seront clonés dans des vecteurs d'expression appropriés. Les vecteurs couramment utilisés comprennent les plasmides, les vecteurs viraux, etc. Le processus de clonage comprend généralement les étapes suivantes :
-Amplification par PCR : utilisation de la réaction en chaîne par polymérase (PCR) pour amplifier la séquence du gène cible à partir d'une matrice d'ADN.
-Digestion et connexion : les produits de PCR sont digérés avec des vecteurs d'expression à l'aide d'endonucléases de restriction, puis reliés entre eux par des ADN ligases.
-Transformation : transformer le vecteur d'expression connecté en hôtes bactériens tels que Escherichia coli pour former un plasmide recombinant.
-Identification : les plasmides recombinants ont été identifiés par PCR, digestion enzymatique, séquençage de l'ADN et d'autres méthodes pour confirmer que le gène cible a été cloné avec succès dans le vecteur.
3. Protéine cible d’expression :
Transfectez le vecteur d'expression construit dans des cellules hôtes cibles, telles que des cellules de mammifères, des cellules de levure, des cellules d'insectes, etc. Dans les cellules, le vecteur d'expression est transcrit en ARNm puis traduit en protéines.. 3X FLAG PEPTIDE sera exprimé avec la protéine cible en tant qu'étiquette protéique.
4. Extraction des protéines :
Recueillez les cellules transfectées et effectuez la fragmentation cellulaire, la centrifugation et d’autres traitements pour obtenir l’extrait protéique total.
5. Protéine purifiée :
En utilisant des techniques de purification par affinité telles que l'immunoprécipitation et la chromatographie d'affinité, les protéines cibles contenant des étiquettes 3X FLAG PEPTIDE ont été purifiées à partir de l'extrait total. Cela implique généralement de lier les anticorps anti-FLAG aux protéines contenant le PEPTIDE 3X FLAG, puis de les séparer à l'aide de colonnes de chromatographie d'affinité ou de billes magnétiques.
6. Identifiez les protéines :
La protéine purifiée a été identifiée et quantifiée par électrophorèse sur gel SDS-PAGE, immunoblot, spectrométrie de masse et d'autres technologies pour garantir sa pureté et son intégrité.
Effets indésirables
Dans la recherche biomédicale et les expériences liées aux protéines, les peptides marqueurs jouent un rôle crucial. Ils peuvent aider les chercheurs à purifier, détecter et localiser les protéines cibles, favorisant ainsi grandement le développement de la science des protéines.Peptide 3XFLAGest un peptide tag commun et largement utilisé composé de trois séquences de tags FLAG répétées. L'étiquette FLAG a été conçue à l'origine par Hopp et al. en 1988, puis développé en variants tels que 3XFLAG, qui ont une affinité et une spécificité élevées et peuvent se lier à des anticorps spécifiques, facilitant ainsi l'isolement et l'identification ultérieurs. Bien que 3XFLAG ait apporté de nombreuses commodités dans les expériences, comme d'autres agents biologiques, il peut également provoquer des effets indésirables.
Effets indésirables d’origine immunitaire
Immunogénicité
L'immunogénicité fait référence à la capacité d'une substance à stimuler le système immunitaire de l'organisme afin de produire une réponse immunitaire.. 3XFLAG, en tant que segment peptidique exogène, peut être reconnu par le système immunitaire de l'organisme comme un composant « non-soi », déclenchant ainsi une réponse immunitaire. Bien que la séquence 3XFLAG soit relativement courte, elle peut dans certains cas activer les lymphocytes B et les lymphocytes T, conduisant à la production d’anticorps. Ces anticorps se lient non seulement au 3XFLAG libre, mais peuvent également reconnaître et se lier aux protéines de fusion exprimant l'étiquette 3XFLAG, affectant ainsi la fonction et la distribution normales de la protéine de fusion.
Réactions allergiques
La réaction allergique est une réponse immunitaire anormale provoquée par une hypersensibilité du système immunitaire à certains allergènes. Les individus peuvent ressentir des réactions allergiques lors de l’utilisation de 3XFLAG à des fins d’expérimentation ou de traitement. La gravité des symptômes des réactions allergiques varie. Les cas bénins peuvent présenter des symptômes locaux tels que des démangeaisons, des éruptions cutanées et un érythème, tandis que les cas graves peuvent déclencher des réactions allergiques systémiques telles qu'un choc anaphylactique, caractérisé par une chute brutale de la tension artérielle, des difficultés respiratoires et une perte de conscience, ce qui constitue une menace sérieuse pour la sécurité des personnes.
Réactions allergiques
Le mécanisme des réactions allergiques est principalement lié aux anticorps IgE du système immunitaire. Lorsque l’organisme entre en contact pour la première fois avec 3XFLAG, le système immunitaire le reconnaît comme un allergène et stimule les cellules B à produire des anticorps IgE spécifiques. Ces anticorps IgE se fixent à la surface des mastocytes et des éosinophiles. Lorsque le corps entre à nouveau en contact avec 3XFLAG, il se lie aux anticorps IgE à la surface des cellules, incitant les mastocytes et les éosinophiles à libérer des médiateurs bioactifs tels que l'histamine et les leucotriènes, entraînant l'apparition de symptômes allergiques.
Risque de maladies auto-immunes
Une exposition prolongée ou répétée à 3XFLAG peut augmenter le risque de développer des maladies auto-immunes. Les maladies auto-immunes font référence à un type de maladie dans lequel le système immunitaire de l'organisme attaque par erreur ses propres tissus et organes, entraînant des lésions tissulaires et des déficiences fonctionnelles.. 3XFLAG peut inciter le système immunitaire à produire des anticorps à réaction croisée et des cellules T via un mécanisme de simulation moléculaire, dans lequel sa séquence d'acides aminés est similaire à la séquence de certaines protéines du corps lui-même.
Ces cellules immunitaires et ces anticorps attaquent non seulement le 3XFLAG étranger, mais endommagent également par inadvertance les tissus normaux du corps, entraînant des maladies auto-immunes. Par exemple, certaines maladies auto-immunes comme le lupus érythémateux disséminé et la polyarthrite rhumatoïde peuvent être liées à des réactions auto-immunes induites par des substances exogènes. Bien qu’il n’existe actuellement aucune preuve claire suggérant que 3XFLAG provoque directement des maladies auto-immunes, ce risque potentiel ne peut être ignoré.
L'impact sur la fonction cellulaire
Dans certaines études expérimentales, il a été constaté que des concentrations élevées de 3XFLAG pouvaient avoir des effets toxiques sur les cellules. Les manifestations de cytotoxicité comprennent des modifications de la morphologie cellulaire, une perturbation de l'intégrité de la membrane cellulaire, des altérations de l'activité enzymatique intracellulaire et une inhibition de la prolifération cellulaire. Son mécanisme d'action peut être lié à l'interaction entre 3XFLAG et la membrane cellulaire. En raison de la forte charge négative de 3XFLAG,
il peut se lier à des composants chargés positivement sur la membrane cellulaire par le biais d'interactions électrostatiques, modifiant la perméabilité et la fluidité de la membrane cellulaire, conduisant à une fuite de substances intracellulaires ou à l'entrée de substances nocives de l'extérieur, affectant ainsi les fonctions physiologiques normales de la cellule. En outre, 3XFLAG peut également pénétrer à l’intérieur des cellules, interférer avec les voies de signalisation, la synthèse des protéines et d’autres processus, exacerbant ainsi les dommages cellulaires.
Effets sur les voies de signalisation cellulaire
3XFLAG peut interférer avec les voies de signalisation intracellulaires et affecter les activités physiologiques normales des cellules. La voie de signalisation cellulaire est un terme collectif désignant une série d'événements moléculaires dans lesquels les cellules répondent à des stimuli externes, régulant des processus importants tels que la croissance cellulaire, la différenciation et l'apoptose.. 3XFLAG peut interférer avec la transmission normale des voies de signalisation en interagissant avec des molécules clés de la voie de signalisation, modifiant ainsi l'activité ou les niveaux d'expression des molécules de signalisation.
Par exemple, il peut se lier aux récepteurs à la surface des cellules, inhibant de manière compétitive la liaison des ligands naturels aux récepteurs et bloquant la transmission du signal ; Alternativement, il peut pénétrer dans la cellule et se lier aux protéines de transduction du signal, affectant la phosphorylation, la déphosphorylation et d’autres processus de modification des protéines, interférant avec la transmission et l’amplification du signal. Cette interférence avec les voies de signalisation cellulaire peut conduire à un dysfonctionnement cellulaire, affectant des processus tels que la prolifération cellulaire, la différenciation et l'apoptose, qui à leur tour peuvent avoir des effets néfastes sur le développement et le fonctionnement normaux des tissus et des organes.
Effets sur le métabolisme cellulaire
Le métabolisme cellulaire est le terme général désignant une série de réactions chimiques qui se produisent dans les cellules, fournissant une base énergétique et matérielle aux activités de la vie cellulaire.. 3XFLAG peut affecter les processus métaboliques cellulaires, interférer avec la production d'énergie cellulaire et la synthèse de substances. Par exemple, cela peut affecter la fonction des mitochondries, qui sont les principaux sites de respiration aérobie et de production d'énergie dans les cellules.. 3XFLAG peut modifier la perméabilité et le potentiel de la membrane mitochondriale en interagissant avec les protéines ou les lipides de la membrane, affectant ainsi la fonction de la chaîne respiratoire mitochondriale et la synthèse de l'ATP.
conduisant à un approvisionnement énergétique cellulaire insuffisant. En outre,Peptide 3XFLAGpeut également interférer avec les processus intracellulaires tels que le métabolisme du glucose et le métabolisme des lipides, affectant l'équilibre de la synthèse et de la décomposition des substances dans les cellules et ayant un impact négatif sur les fonctions physiologiques normales des cellules.
Foire aux questions
Qu'est-ce qu'un DRAPEAU 3X ?
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Le peptide 3X FLAG est un peptide synthétique de 23 résidus d'acides aminés. Le motif Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp est répété trois fois dans le peptide. Huit acides aminés à l'extrémité C-comprennent la séquence FLAG classique (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys).
Quelle est la différence entre la balise flag-et 3xflag ?
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L'étiquette Flag-est une séquence unique de 8 acides aminés couramment utilisée dans les applications d'immunoprécipitation, de Western Blot et d'immunofluorescence. En revanche, le tag 3x Flag-contient 22 acides aminés, ce qui lui confère une plus grande affinité pour les anticorps anti-Flag et le rend particulièrement avantageux pour les flux de travail de purification des protéines.
Comment dissoudre 3X FLAG ?
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Pour préparer une solution mère, dissoudre dans du TBS (Tris-HCl 50 mM, pH 7,4, avec NaCl 150 mM) à une concentration de 5 mg/mL. Aliquoter et conserver à –20 degrés. La congélation et la décongélation répétées ne sont pas recommandées.
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